奥希替尼是一种不可逆的三代EGFR-TKI，可以选择性地抑制EGFR敏感突变和T790M突变。2017年3月，奥希替尼在华上市，开创了EGFR TKI耐药后T790M阳性患者的精准治疗新时代。随着泰瑞沙的上市，如何敏感、准确地检测T790M突变成为临床关注的热点。为此分别从以下4个方面进行系统梳理：EGFR T790M检测的重要性、检测标本的选择、检测方法学比较，以及血浆动态监测的价值。国际、国内的权威指南均推荐，所有EGFR TKI耐药后的患者，都应该进行T790M突变检测。那么应该采用何种方法进行T790M突变检测呢？本文将详细为您解答。

　　泰瑞沙在华上市，拉开了T790M突变患者精准治疗新时代。指南推荐，对于EGFR-TKI耐药的患者，都进行T790M突变检测；组织活检是目前T790M突变检测的标准方法。对于部分无法取样的患者，可以尝试采用细胞学标本（如恶性胸水），血液标本（ctDNA）和尿液标本（ctDNA）作为补充手段。那么，目前T790M突变检测，我们有哪些检测方法呢？T790M突变检测主要分为3类：1. 非数字化ARMS法：如FDA批准的泰瑞沙伴随诊断Cobas® EGFR突变检测试剂盒V2（罗氏，石蜡组织切片和血浆）；艾德ADx®-ARMS（石蜡组织切片）、Super-ARMS（血浆）；和凯杰Therascreen EGFR kit/plasma RGQ PCR kit。2. 数字化PCR：常见的有赛默飞QuantStudioTM3D数字PCR系统；伯乐微滴式数字PCR；BEAMing数字PCR。3. 下一代测序技术，主要包括：Illumina和Ion Torrent（赛默飞）。

　　（一）EGFR突变检测的伴随诊断平台

　　目前，已经有多个基于PCR检测的诊断平台用于EGFR突变检测，包括cobas法、ARMS法、BEAMing法、数字PCR法、HRM法、DHPLC法、质谱分析基因分型、电场诱导释放与测量法（EFIRM）和二代测序（NGS）。以下总结了最常用的检测平台的主要性能。

　　（二）EGFR T790M突变检测的技术比较

　　上期我们提到目前国际、国内的权威指南推荐，应优先进行组织检测。（上期回顾：EGFR-TKI耐药后的检测标本选择：组织活检vs.液体活检）

　　面对众多的检测平台，组织检测该选择何种方法呢？在奥希替尼的I期扩展队列中，中心实验室采用罗氏Cobas组织检测，EGFR T790M的阳性率为62%（138/222）。在三代EGFR TKI Rociletinib I-II期研究中，中心实验室采用罗氏Cobas组织检测或凯杰Therascreen，EGFR T790M的阳性率为53%（78/148）。EGFR-TKI耐药后患者再行组织检测，大部分采用的是活检穿刺的小标本，由于样本量较小且组织存在异质性，推荐采用较敏感的ARMS法，比如经过临床试验验证的Cobas。近年来，开发出一些高敏感度的检测方法，但进行组织检测时，需要警惕假阳性的可能。

　　当组织样本不可及时，需要考虑其他样本比如血浆作为替代。目前血浆T790M突变检测的不同方法敏感性及特异性各有不同。Thress等人的研究对比了cobas法、BEAMing法、数字PCR法和ARMS法，结果显示在T790M突变检测上，数字检测平台的敏感度优于非数字检测法。在临床上，数字PCR能实现绝对定量，这是优于qPCR法的相对定量的，尤其是对于低丰度突变。在数字PCR对比ARMS法的研究中发现，数字PCR法的T790M突变率更高，分别为43.0%和25.2%，数字PCR法的检测下限为0.03%。另一个研究比较了NGS和cobas法对血浆中EGFR突变（EGFR exon19del，L858R和T790M突变）的定量检测，发现这两种方法存在较强的相关性（R2>95%, P<0.0001。因此，如果采用血浆进行T790M突变检测，推荐采用灵敏度相对较高的数字PCR或NGS平台。下表2，3总结了采用不同血浆检测平台进行EGFR T790M突变检测。

　　对于EGFR TKI耐药的患者，应优先采用组织检测，推荐使用ARMS方法。但如果患者进行血浆T790M检测，推荐采用灵敏度相对较高的数字PCR或NGS平台，对于血浆检测T790M阴性的患者，应该再行组织检测加以验证。

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